檢測試劑盒為何會出現(xiàn)錯誤的實驗結(jié)果
點擊次數(shù)：729 更新時間：2019-04-23
檢測試劑盒為何會出現(xiàn)錯誤的實驗結(jié)果
檢測試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種高敏感性的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
檢測試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的濃度。
檢測試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
1．內(nèi)源性物質(zhì)
普遍認為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：補體、嗜異性抗體等。
（1）補體
檢測試劑盒中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（2）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時無效。
2．外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于檢測試劑盒的血標(biāo)本的采集、貯存不當(dāng)?shù)仍蛩隆Ｈ鐦?biāo)本溶血、標(biāo)本被細菌污染等。
（1）標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血。
（2）標(biāo)本受細菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標(biāo)本和溶血標(biāo)本一樣，可產(chǎn)生非特異性顯色干擾測定結(jié)果。
